加标回收率用浓度还是质量浓度计算 回收率的计算公式?
一、回收率的计算公式?
加入已知浓度A的待测物质,用该方法测定其浓度值B,回收率=(A/B)×100%.注:已知浓度A应在该检测方法的可以检测浓度范围内。
加标回收率,一般是测定样品中待测物质的浓度为C;再取另一份样品,加入定量待测物质(定量加入待测物质的理论浓度为E)(加入待测物质的量最好与样品中待测物质的量一样)测定其浓度为D,加标回收率=((D-C)/E)×100%.
二、求回收率函数公式?
回收率的计算公式:回收率=(A/B)×100%,而回收率包括绝对回收率和相对回收率,其中绝对回收率考察的是经过样品处理后能用于分析的药物的比例。因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物,经过样品处理都有一定的损失。
相对回收率严格来说有两种,一种是回收试验法,另一种是加样回收试验法。前者是在空白基质中加入药品,标准曲线也是如此,这种测定用得较多,但有标准曲线重复测定的嫌疑。第二种是在已知浓度样品中加入药物,来和标准曲线比,标准曲线也是在基质中加药物。
三、胶回收产物浓度一般在多少?
胶回收产物浓度在0.03pmol/ul浓度属于正常。
胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性(电荷)和疏水性使DNA与柱子结合。因此,若电泳缓冲液的PH偏高,可在溶胶液中加入10ul(PH 5.0,3mol/L的 NaAC);为了使DNA分子更好的拦截在膜上,可以添加30%异丙醇在加热溶解胶后的液体里。
将柱子在室温放置几分钟(大约需10分钟),以使乙醇充分挥发。少加些洗脱液,尽量减少回收体积,一般用30-50μl洗脱液洗脱(不能太少,否则无法浸湿膜反而不利于洗脱)。洗脱液滴在膜中央,以充分洗脱结合在膜上的DNA。
胶回收产物介绍:
如果要胶回收,最好还是用试剂盒,方便,回收率也略高。实在要手工回收,可以切胶后加入3倍体积TE,水浴熔化,酚、酚/氯仿抽提干净,乙醇沉淀即可。如果PCR扩增特异性好,只是简单的PCR产物纯化回收。
可以在PCR产物中加入50ug/ml 的蛋白酶K,37度1h,酚/氯仿抽提一次,氯仿抽提一次,上清加入0.1体积的醋酸钠,2.5体积的无水乙醇沉淀回收。
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