测定酶活力的实验步骤？

一、测定酶活力的实验步骤？

一)制作对—硝基苯酚(pNP)标准曲线

按下表分别取不同体积的对—硝基苯酚(4mM)，用50mM醋酸缓冲溶液(pH5.6)稀释成一系列浓度。然后在分光光度计上测定λ=410nm处的光密度，以浓度为横坐标，光密度为纵坐标作曲线。

(二)α-葡萄糖苷酶活力测定

取 0.8mL对—硝基苯酚α-D-葡萄糖苷(pNPG)(1.25mM)，加入 0.2mL大曲浸提液，迅速混匀后于40℃水浴中保温10分钟，取出并立即加入2mL 1 M的碳酸钠溶液终止反应，用分光光度计测定λ=410nm处的光密度，在标准曲线上查出相当于对—硝基苯酚的量，并计算酶活力。酶活力单位定义为：在上述分析条件下每分钟催化形成一个微摩尔pNP所需要的酶量为一个活力单位。

五、计算

V—酶液量mL；

n:—酶液稀释倍数；

t—反应时间(min)

二、旋光法测定酶活力原理？

酶活性测定法是利用酶能专一而高效地催化化学反应的性质，通过测定酶促反应速度来检知体液等生物样品中某种酶的含量和活性的分析技术。

酶促反应速度的测定可采用两种方式：

一是测定完成一定量反应所需的时间;二是测定单位时间内的酶促反应量。前者称为终点法，后者称为动力学法。

终点法是在特定条件下，将样品中要检知的酶作用一定量的底物，然后根据反应进行到某一程度

三、为什么采用紫外吸收测定酶活力？

因为对紫外线的吸收越强，可以说明酶的活力越强。

四、中性蛋白酶活力测定方法？

酸性、中性蛋白酶活力单位在一定温度(40oc土o.2OC)和相应的pH条件下(酸性蛋白酶pH3.0，中性蛋白酶pH7.2)，在1min内水解酷蛋白产生相当于1问酣基氨基酸(由酷氨酸等同物表示)的酶量，为1个酶活单位，以U表示。

　　蛋白酶在一定的温度和pH条件下，水解酷蛋白底物产生含有酣基的氨基酸(如z酷氨酸、色氨酸)，在碱性条件下，可将福林试tj(Fo!in)还原，生成铝蓝与鹊蓝，其颜色的深浅与酣基氨基酸含量成正比。通过在680nm测定其吸光度，得到酶解产生的酣基氨基酸的量，进而计算蛋白酶活力。

　　试剂和材料：碳酸铀溶液、三氯Z酸溶液、盐酸溶液、盐酸溶擅液、氢氧化纳溶液。

　　福林(Folin)试剂于2000mL磨口回流装置中加入鸽酸铀(Na2W040)100.0g、铝酸铀(Na2Mo0425.0g、水700mL、85%磷酸50mL、被盐酸100h，取下回流冷却器，在通风橱中加入硫酸铿(Li2S04)50g，水50mL和数滴浓澳水(99%)，再微沸15min，以除去多余的澳(冷却后仍有绿色需再加澳水，再煮沸除去过量的澳)，冷却后加水定容至1000mLot昆匀、过滤。试剂应呈金黄色，贮存于棕色瓶内。使用时，以1份福林(Folin)试剂与2份水混匀，制成稀福林(Folin)试剂。

五、土壤磷酸酶活性的测定方法？

土壤酶活性的测定方法

土壤酶活性的测定：酸性磷酸酶采用磷酸苯二钠比色法测定；过氧化氢酶活性采用KMnO4滴定；脲酶采用扩散滴定法测定；蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定；转化酶活性以0.1N的Na2S2O3滴定法测定；脱氢酶活性采用三苯基甲比色法。

六、为什么测定酶活力的试剂要预热？

让其先达到最适温度，再进行测试。因为酶的催化速率是很惊人的，所以必须让其一测试就是最佳状态。酶活力的大小，可以用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示，酶催化的反应速度越大，则酶活力也越温度大，所以测定酶的活力就是测定酶促反应的速度。

而温度、PH、底物浓度、酶浓度、抑制剂、激活剂和反应时间等均能影响酶促反应速度，因此需要严格控制。

七、为什么酶活力测定时应以测定酶促反应的初速度为正？

适反应温度，酶活力将会下降。

④PH对酶活力的影响：酶在最适PH范围内表现出活性，大于或小于最适PH，都会降低酶活性。

⑤激活剂对酶活力的影响：某些无机阳离子、阴离子、有机化合物可作为激活剂，能够激活酶，使其表现出催化活性或强化其催化活性。

⑥抑制剂对酶活力的影响：酶的抑制剂能够减弱、抑制甚至破坏酶的活力，它可降低酶促反应速度。

八、测定酶活力时为什么要加过量的底物？

在一般的酶促反应体系中,底物往往是过量的,测定初速度时,底物减少量占总量的极少部分,不易准确检测,而产物则是从无到有,只要测定方法灵敏,就可准确测定.因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适. 测初速度的原因也是这个,因为只有在初速度下,才能保证底物过量,酶被完全饱和,如果你用反应中某一阶段的速度的话,很难保证底物还是过量的,

九、土壤的羟胺氧化还原酶的测定方法？

本发明涉及土壤中羟胺还原酶活性的测定，具体地说是。背景技术 土壤中的羟胺还原酶能将在土壤中氮代谢(亚硝酸盐的还原或者氨的氧化)过程中形成的中间产物羟胺还原成氨，土壤中的还原态化合物可作为氢的供体。因此，土壤中羟胺还原酶活性的强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失，间接影响氮肥的利用效率。土壤中羟胺还原酶的活性受土壤条件如水分、温度、土壤质地的强烈影响，同时也受到农田耕作制度、管理措施以及不同作物的影响。因此，对土壤中羟胺还原酶活性的检验有很重要的意义。...

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十、酶的活力回收率和相对酶活力？

酶活力单位：用来表示酶活力大小的单位，通常用酶量来表示。

其中一个称酶活力国际单位，规定为：在特定条件下，1分钟内转化1微摩尔底物，或者底物中1微摩尔有关基团所需的酶量，称为一个国际单位（IU，又称U）。另外一个国际酶学会议规定的酶活力单位是Kat，规定为：在最适条件下，1秒钟能使1摩尔底物转化的酶量。Kat和U的换算关系：1 Kat=6×107U， 1U=16.67n Kat 酶的比活力（specific activity）：是指每毫克质量的蛋白质中所含的某种酶的催化活力。是用来度量酶纯度的指标。酶的回收率是指纯化后（反应后）的酶的总活力与纯化前（反应前）的酶的总活力之比。纯化倍数是指某步骤后的酶活力与该步骤前的酶活力之比。